準(zhǔn)確移取稀釋 20 倍后的細(xì)梗香草皂苷提取 液 10mL 于具塞試管中，加入 3% 活性炭，搖勻 后放入 60℃水浴鍋中脫色 60min，固定其他條 件，分別對活性炭添加量、脫色時間、稀釋梯度 及脫色溫度 4 個因素進(jìn)行單因素脫色試驗(yàn)，考察 各因素對細(xì)梗香草皂苷的保留率和脫色率的影 響。單因素設(shè)計(jì)水平見表 1。

正交試驗(yàn)優(yōu)化脫色條件

為考察各因素的交互影響，根據(jù)單因素試驗(yàn) 結(jié)果，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以活性炭添加量、脫 色時間、稀釋梯度及脫色溫度為 4 個因素，細(xì)梗 香草皂苷提取液的保留率和脫色率為考察指標(biāo)， 按照表 2 設(shè)計(jì) L（9 34 ）正交試驗(yàn)，從而優(yōu)化脫色 工藝條件。

細(xì)梗香草皂苷抑菌活性試驗(yàn)

將活化后培養(yǎng)至對數(shù)期的大腸桿菌、金黃色 葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和白色念球菌的菌懸液 濃度調(diào)至 106 CFU/mL，取 100μL 菌液于 LB 培養(yǎng) 基平板上均勻涂布，打孔器分別打孔，孔中加入 不同濃度梯度的細(xì)梗香草皂苷提取液 100μL，平 板置于 4℃條件下預(yù)擴(kuò)散 2h 后，白色念球菌于 30℃恒溫培養(yǎng)，其余放入 37℃恒溫培養(yǎng) 24h 后， 游標(biāo)卡尺測定抑菌圈的直徑。同時以甲醇溶液作 為空白對照。

活性炭添加量對脫色效果的影響

如圖 1 所示，總體上隨著活性炭添加量的增加，皂苷脫色率逐漸升高，保留率漸漸減小。當(dāng) 添加量達(dá) 3% 后，皂苷脫色率的增幅趨勢變小； 保留率隨活性炭用量增加而逐漸減小。根據(jù)試驗(yàn) 結(jié)果，為保證皂苷脫色率和保留率達(dá)一定水平， 選取活性炭用量 2% 為最佳添加量。

脫色時間對皂苷脫色效果的影響 由圖 2 可以看出，伴隨著脫色時間的延長， 皂苷的脫色率有所上升，在 60min 之后趨于平 穩(wěn)，而保留率相對處于比較平穩(wěn)的水平。這說 明，當(dāng)試驗(yàn)進(jìn)行到一定程度后，脫色時間對脫色 效果的影響較不明顯，這可能由于活性炭對色素 的吸附作用在一定時間內(nèi)達(dá)到了平衡。所以考慮 選擇 60min 為脫色時間最優(yōu)條件。